一种纯化蛋白质的方法

1，沉淀。

2.电泳:蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中带电，在电场中可以向电场的正极或负极移动。根据支持物的不同，有薄膜电泳、凝胶电泳等。

3.透析:用透析袋将大分子蛋白质与小分子化合物分离的方法。

4、色谱法:

a、离子交换层析，利用蛋白质的两性自由性质，在一定的PH值下，每种蛋白质的电荷量和性质不同，所以可以用离子交换层析分离。如阴离子交换层析，负电荷小的蛋白质先被洗脱。

b、分子筛，又称凝胶过滤。蛋白质这种小分子进入洞内并长时间停留，而蛋白质这种大分子不能及时进入洞内，直接流出。

5.超速离心:可用于分离纯化蛋白质，测定蛋白质的分子量。不同的蛋白质由它们不同的密度和形状来区分。

纯化蛋白质的注意事项:

1，为了避免蛋白质变性，不要剧烈搅拌样品，反复冻融。

2.缓冲溶液的成分尽可能模拟细胞的内环。

3.为了避免蛋白质的氧化，在缓冲溶液中加入0.1 ~ 1 mmol/LDTT(二硫苏糖醇)(或β-巯基乙醇)。

4.为了避免重金属对目的蛋白的破坏，添加了1 ~ 10 mmol/ledta金属螯合剂。

5、为了避免微生物滋生，使用灭菌溶液。在纯化任何一种蛋白质时，都要时刻注意它的稳定性，保护它的活性。我们需要记住以下一般预防措施。

6、尽量在冰上或冷库中操作。

7.蛋白质浓度不能太稀。

8.除非是聚焦层。否则pH值要合适，防止缓冲溶液的pH值与pI的pH值相同，以免蛋白质沉淀。

9.使用蛋白酶抑制剂，避免蛋白酶对目标蛋白的降解；细胞内蛋白质纯化时，加入DNA酶降解DNA，避免DNA对蛋白质的污染。