如何通过目的蛋白的已知肽序列设计引物获得目的基因？

1.当总RNA被逆转录时，对应于mRNA的cDNA具有一条与mRNA序列相同的链，另一条反向互补的链(rc)是模板链。你在纸上画出来就应该清楚了，以mRNA序列(有意链)中ATG开始的20个碱基为正向引物，以模板链TCA(TGA的反向互补序列)开始的20个碱基为反向引物。

2.由于编码序列的扩增需要严格的引物位置(从ATG到TGA)，设计的引物通常得分较低(引物二聚体已形成或存在严重错配)，有时会影响目的产物的扩增。我有时候先设计一对引物，分别在5’和3’UTR区域，用软件设计，保证引物好用；这样以cDNA为模板进行扩增，然后以此产物为模板，用一对从ATG到TGA的引物进行扩增，很大程度上避免了错配，更容易扩增成功。