菜心如何进行花药培养和小孢子培养?

花药培养和花粉培养是获得单倍体的主要途径。吴慧娟等人(1998) 进行了紫色花的花药培养,中国开花中国开花中国开花中国开花中国开花中国开花中国开花中国开花中国开花中国开花中国开花中国开花中国开花 开花中国开花中国开花中国开花中国开花中国开花中国开花中国开花中国开花中国开花中国开花中国开花中国开花中国开花中国开花中国开花中国开花。

通过游离小孢子培养获得双单倍体植株,可以加快育种进程,提高选择效率,受到世界各国育种家的青睐。自从Litcher等人首次从甘蓝型油菜小孢子培养中获得胚状体以来,白菜、甘蓝、芥菜等芸薹属蔬菜的小孢子培养也获得了成功。李光涛等(1996)利用紫色菜心游离小孢子培养再生植株,但成胚率极低。

顾红辉等(2003)利用早熟的菜心为材料,研究了菜心的开花特性。游离小孢子先在NLN-17培养基中32℃热激培养2天,然后换成NLN-10培养基,继续在24℃培养,与不更换培养基直接用NLN-10培养基处理相比,显著提高了胚状体的产量,更新培养基可以提高胚状体的质量。秋水仙素0.8mg/L直接处理游离小孢子可明显提高胚状体产量,秋水仙素浓度过高不利于胚形成和胚状体萌发。利用流式细胞仪(FCM)对菜心小孢子再生植株的染色体倍性进行了鉴定。结果表明,自发二倍体率(70%)和四倍体率(8%)较高,而其他多倍体和混合倍性相对较少。

朱云华等(2003)对菜心进行了小孢子培养。结果表明,影响游离小孢子培养的主要因素有:菜心基因型差异显著影响游离小孢子培养;小孢子分离前,花序经4℃低温处理12天,明显提高了小孢子分离频率。当蔗糖浓度达到13%时,即培养基具有一定的渗透压,会促进胚状体的诱导和发育。

王陶陶等人(2004)使用了五种基因型的紫色开花中国开花中国开花中国开花中国开花中国开花中国开花中国开花中国开花中国开花中国开花中国开花中国开花中国开花中国开花。结果表明,基因型8902胚胎产量最高,达到每皿42个胚胎,最少为0。添加适量的活性炭可使胚胎产量提高近3倍。同时还研究了胚状体进一步再生的因素:培养基中添加1.2%琼脂时再生率最高,达到50.1%;4℃处理10d可使再生率从45%提高到65%。随着胚龄的延长,再生植株率明显下降,最适胚龄为20 ~ 24天。而培养基B5和MS对小孢子再生率影响不大。

对于菜心,无论是花药培养还是花粉培养,接种前花序低温预处理(4℃1 ~ 2天)和接种后高温预处理(33℃1 ~ 2天)都能促进胚的形成,提高诱导频率。花粉培养的胚状体诱导率高于花药培养。培养基中的蔗糖浓度和有效因子的添加都会影响花药和花粉培养中胚状体的诱导率。两种培养基中蔗糖浓度均为13%,最适AC添加量为0.5g/L。在花药培养中,培养基中添加100 ~ 120 mg/L AgNO3 _ 3可促进胚的产生。在植株上喷施200毫克/升的多效唑或40毫克/升的甲基强的松龙,用1.0毫克/升或0.6毫克/升的L Met浸种,在培养基中添加0.5毫克/升的多效唑或0.3毫克/升的甲基强的松龙,均可促进胚胎发生。不同基因型的胚状体诱导频率差异很大(朱云华,2003)。